放射性标记化合物的体外ADME研究

10 µM标记化合物[¹⁴C]化合物1在大鼠、犬、猴和人肝细胞中孵育后，通过LC-HRMS联用在线同位素检测仪分析检测，得到原药经不同种属肝细胞代谢后的代谢物谱（见图1），共检测到12个代谢产物，其中人肝细胞中检测到4个代谢产物，这4个产物在大鼠和猴肝细胞中均可以检测到，但只有3个产物能在犬肝细胞中检测到。各代谢产物占孵育样品总放射性比例见表 1。

将10 µM的[¹⁴C]TA-2与冷冻人肝细胞在二氧化碳培养箱（37°C ，5% CO2，饱和湿度）中孵育4小时。[¹⁴C]氯氮平、[¹⁴C]对乙酰氨基酚和[³H]华法林在相同条件下孵育，作为阳性对照。孵育后，采用有机试剂提取样品，提取后上清液通过LC-RAM/HRMS检测代谢率，提取后残渣经有机试剂清洗、溶解后，测定其放射性浓度和蛋白浓度。所得数据用于计算净共价结合（CVBnet），代谢导致的共价结合比例（fcvb），每日共价结合负荷（Daily CVB Burden）等数据，具体数据见表2。