药物代谢稳定性研究

肝微粒体由肝脏组织匀浆经过差速离心所得，肝微粒体富含各种代谢酶尤其是CYP450酶，易于储存和使用，成本相对较低。肝细胞保持了完整的细胞结构，拥有更完整的代谢酶系统和不同清除途径的辅酶因子。此外，与肝微粒体不同的是，肝细胞还保留了细胞膜和膜上的转运体蛋白。肝微粒体稳定性和肝细胞稳定性实验结果差异的主要原因如下：

1.当化合物的膜渗透能力较差或为外排转运体底物时，化合物由于在肝细胞体系中无法完全暴露于代谢酶中，会导致化合物在肝细胞中代谢速率较慢。

2.Non-CYP介导的代谢包括Phase Ⅰ 的AO、MAO和Phase Ⅱ的UGT代谢等。这些酶大多不存在于肝微粒体中或肝微粒体中缺少UGT的辅助因子，相比之下，这些Non-CYP代谢酶或相应的辅助因子均存在于肝细胞中。因此，主要经由AO或MAO等Non-CYP酶代谢的化合物在肝微粒体和肝细胞稳定性实验中的结果可能呈现出某些差异。

另有一些经验性的统计研究发现，肝微粒体稳定性与化合物的理化性质、渗透性和酶表型有一定的关系，例如有研究发现主要经CYP3A代谢的化合物在肝微粒体中的固有清除率高于肝细胞稳定性中的固有清除率，但经CYP2D6代谢的化合物在两种基质中的代谢无明显区别。

如果一个化合物在开展肝微粒体和悬浮肝细胞代谢稳定性实验时无法观察到其明显的代谢，最长孵育时间点的剩余率接近100%，如果想计算出该类化合物准确的清除率数值，可以采用适用于该类化合物的代谢模型，如悬浮肝细胞relay方法以及贴壁肝细胞实验方法。

近年来Non-P450酶介导的代谢领域研究得到了越来越多的关注。这主要是因为研发人员为了减少P450代谢，引入对P450不敏感的化学基团，从而增加了被Non-P450酶代谢的比例。为了考察化合物是否被Non-P450酶所代谢，应根据代谢酶的类型选择合适的基质，通过添加抑制剂的方式进行筛选，也可以使用重组酶进行稳定性实验。一相代谢中主要的Non-P450酶包括醛氧化酶（AO）、黄嘌呤氧化酶（XO）、醛酮还原酶（AKR）、黄素单加氧酶（FMO）和单胺氧化酶（MAO），这5种酶在2005-2016年FDA批准的热销药物Top 200中代谢参与率占比约5%。